分子克隆实验指南（原书第四版）（套装上中下册） [Molecular Cloning: A Laboratory Manual] pdf epub mobi txt 电子书 下载 2025

简体网页||繁体网页

☆☆☆☆☆

[美] M.R.格林，J.萨姆布鲁克 编，陈薇，杨晓明 译

图书标签:

• 分子克隆
• 分子生物学
• 实验指南
• 生物技术
• 基因工程
• DNA克隆
• 蛋白质表达
• 实验室手册
• 生物化学
• 遗传学

出版社： 科学出版社

ISBN：9787030519979

版次：1

商品编码：12051589

包装：平装

丛书名： 生命科学实验指南系列

外文名称：Molecular Cloning: A Laboratory Manual

开本：16开

出版时间：2017-03-01

用纸：胶版纸

套装数量：3

产品特色

内容简介

　　分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和*性，使本书成为业内*流行、*具影响力的实验室操作指南。第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过更新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍*激动人心的研究策略，包括利用 DNA 甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了必不可少的附录：包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安全原则和危险材料。任何使用分子生物学技术的基础研究实验室都将因拥有一册《分子克隆实验指南》而受益。本书可作为学习遗传学、分子细胞生物学、发育生物学、微生物学、神经科学和免疫学等学科的重要指导，可供生物学、医药卫生，以及农、林、牧、渔、检验检疫等方面的科研、教学与技术人员参考。

　　Originally published in English as Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition, by MichaelR.Green and Joseph Sambrook ? 2012 Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NewYork, USA? 2017 Science Press. Print in China.Authorized Simplified Chinese translation of the English edition ? 2012 Cold Spring Harbor LaboratoryPress. This translation is published and sold by permission of Cold Spring Harbor Laboratory Press, the owner of all rights to publish and sell the same.

内页插图

前言/序言

　　第四版前言

　　人类和模式生物全基因组序列的获得对各领域生物学家现有的科研方式产生了深远影响。对浩瀚的基因图谱的探索需要开发多种新的实验技术和方法，传统的克隆手册必然会过时，已建立的方法也会被淘汰，这都是《分子克隆实验指南》一书全新版本问世的主要推动力。在准备《分子克隆实验指南》（第四版）的初期，我们进行了全面的回顾来决定哪些旧材料应被保留，哪些新材料需要补充，难的是，哪些材料应该被删除。在回顾过程中，许多科学家提出了宝贵的建议，他们的名字在下一页的致谢中列出，我们对他们深表感激。仅是一本实验室手册当然不可能涵盖所有的分子生物学实验方法，所以必须从中做出选择，有时是艰难的选择。我们猜测对于其中一部分选择，有些人会提出异议。然而我们的两个指导原则是：第一，《分子克隆实验指南》是“以核酸为中心”的实验室手册，因而总体上我们没有选取非直接涉及 DNA或 RNA的实验方法。所以，尽管本书中有分析蛋白质之间相互作用的酵母双杂交实验操作的章节，但并不包括许多其他的不直接涉及核酸的蛋白质间相互作用研究方法。第二，本着 John Lockean“为尽可能多的人们做多的善事”的思想，我们尝试囊括尽可能多的广泛用于分子和细胞实验室的以核酸为基础的方法。对我们而言，较为困难的任务是决定哪些材料应该被删除，而这个任务在与冷泉港实验室出版社协商之后难度大大降低，他们同意把较陈旧的方法放在冷泉港方案网站上

　　（www.cshprotocols.org），方便大家免费获取。

　　由于新实验方法的激增，由一个人（甚至两个人）*撰写所有相关的实验方法是根本不现实的。因此，与前一版《分子克隆》大的不同是组织了众多领域内的专家们来撰写指定章节，提供指定方案。没有他们这些科学家的热心参与，本书不可能呈献给大家。自第三版《分子克隆实验指南》后，各种商业化试剂盒层出不穷，这是一把双刃剑。一方面，试剂盒提供了极大的便利，尤其用于个别实验室非常规的实验操作；另一方面，试剂盒可能经常太过便利，使得使用者在进行实验时并不理解方法背后的原理。我们提供商业化试剂盒列表，并描述它们如何工作，尝试解决这一矛盾。许多人对《分子克隆实验指南》（第四版）的出版发挥着重要的作用，我们对他们表示由衷的感谢。Ann Boyle帮助《分子克隆实验指南》（第四版）起步，在项目早期也承担了

　　关键的组织角色，后来，她的任务由其得力助手 Alex Gann接手。Sara Deibler在《分子克隆实验指南》（第四版）所有时期的各个方面都做出了贡献，尤其是协助撰写、编辑和校对。

　　Monica Aalani对第 9章的内容和撰写做出了极大的贡献。我们特别感谢冷泉港实验室出版社员工的热情支持以及卓越合作和包容，尤其是JanArgentine，她负责整个项目并把关财务。感谢我们的项目经理 Maryliz Dickerson、项目编辑Kaaren Janssen、Judy Cuddihy和Michael Zierler，制作经理Denise Weiss，制作编辑KathleenBubbeo，当然还有冷泉港实验室出版社的幕后智囊 John Inglis。Michael R. Green

　　Joseph Sambrook

好的，这是一本名为《分子生物学技术与应用（原书第X版）》的图书简介，旨在详细介绍分子生物学领域的关键技术和最新发展，同时不涉及您提到的《分子克隆实验指南（原书第四版）》的具体内容。 --- 《分子生物学技术与应用（原书第X版）》 图书简介 在生命科学研究飞速发展的今天，对生命现象的深入理解越来越依赖于对分子层面的精确调控与分析。本书旨在为生命科学领域的科研工作者、研究生及相关领域的专业人员，提供一个全面、深入且与时俱进的分子生物学技术框架。我们聚焦于那些构成现代分子生物学实验基石的核心技术及其在生物医学、农业生物技术、基础研究等领域的最新应用。 第一部分：分子生物学基础与核心技术概述 本书的开篇部分将对分子生物学的基本原理进行回顾，着重于基因的结构、表达调控机制，以及核酸和蛋白质在生命活动中的核心作用。我们系统性地梳理了分子生物学实验设计中必须掌握的先决知识，包括但不限于：细胞内分子物质的提取、纯化、定量与质量评估的标准流程。 第二部分：核酸操作与分析技术 本部分是本书的重点之一，详细阐述了从宏观到微观层面操控和解析核酸分子的各项关键技术。 1. 基因组DNA与RNA的提取纯化： 我们不仅介绍了传统方法，更深入探讨了基于固相萃取、液相分离等现代高效分离技术，并针对不同样本（如新鲜组织、福尔马林固定石蜡包埋组织（FFPE）、血液、植物组织等）的特殊性，提供了优化的操作方案和常见问题排查。 2. 聚合酶链式反应（PCR）及其衍生技术： PCR技术作为分子生物学的“瑞士军刀”，其原理的精确掌握至关重要。本章节细致解析了标准PCR、热启动PCR、定量实时荧光PCR（qPCR）的设计原则、引物设计策略、反应体系的优化，以及如何通过熔解曲线分析和高分辨率产物分析提高实验的特异性和灵敏度。对于数字PCR（dPCR）这一前沿定量技术，我们也进行了专门的论述，阐明其在超低丰度目标物检测中的独特优势。 3. 核酸的分子杂交技术： 从经典的Southern/Northern Blotting到现代的荧光原位杂交（FISH），我们详细讨论了探针的制备、标记（如荧光素、生物素标记）、杂交条件的优化，以及信号的检测与定量方法。特别强调了在原位技术中，如何克服组织自发荧光和背景信号的干扰。 4. 核酸测序技术的发展与应用： 本部分对测序技术进行了跨越式的梳理。首先是桑格测序在特定片段验证中的地位，随后重点解析了高通量二代测序（NGS）的原理，包括文库的构建（从片段化到接头连接）、桥式PCR扩增、测序反应（如边合成边测序原理），以及常用的测序平台（如Illumina平台）的数据产出特征。对于三代测序（长读长测序），我们也介绍了PacBio和Oxford Nanopore等技术在全长转录本分析和复杂基因组组装中的革新作用。 第三部分：重组DNA技术与基因编辑 本部分聚焦于如何构建、筛选和应用重组DNA系统，以及当前最受瞩目的基因编辑工具。 1. 限制性内切酶与连接技术： 详细介绍了不同类型限制酶的选择、酶切条件优化，以及连接效率受多种因素（如末端类型、载体/插入片段比例）的影响。 2. 载体系统与转化/转染： 系统比较了原核表达载体（如pET系列）、酵母表达载体、哺乳动物表达载体（如慢病毒、腺病毒载体）的特点、元件组成（启动子、选择标记、拷贝数控制）以及适用的宿主细胞。转化（细菌）和转染（真核细胞）操作的效率优化是本节的实践重点。 3. 基因敲除与定点编辑技术： 详细剖析了CRISPR/Cas9系统的分子机制，包括sgRNA的设计准则（靶向选择、脱靶效应评估）、Cas9核酸酶的类型选择。此外，我们还涵盖了CRISPR的衍生应用，如碱基编辑（Base Editing）和先导编辑（Prime Editing），讨论了它们在提高编辑精度和降低DNA双链断裂风险方面的进展。对于基因编辑后的细胞系鉴定，也提供了明确的验证流程。 第四部分：蛋白质组学基础与蛋白质分析技术 理解分子生物学，最终需要落到蛋白质的功能层面。本部分致力于蛋白质的提取、纯化和功能性分析。 1. 蛋白质的提取与定量： 针对不同亚细胞定位（胞浆、膜蛋白、核蛋白）的蛋白质提取方案，以及Bradford、BCA和Bradford等定量方法的适用性与局限性比较。 2. 电泳与印迹技术： 详述了SDS-PAGE的分离原理、凝胶配制优化，以及Western Blotting中抗体的选择、封闭条件、显影技术（化学发光、荧光检测）的标准化流程。 3. 蛋白质相互作用研究： 重点介绍酵母双杂交（Y2H）和蛋白质互作谱（Co-IP/质谱联用）技术。对于Co-IP，强调了标签抗体的选择、洗脱条件的温和性对复合物稳定性的影响，以及后续的质谱鉴定流程。 4. 蛋白质功能分析： 探讨了酶活测定、磷酸化修饰检测（通过特定抗体或同位素标记）等关键技术，为研究蛋白质的动态功能提供工具。 第五部分：生物信息学在分子实验中的整合 现代分子实验产生海量数据，生物信息学分析已成为不可或缺的一环。本书介绍了如何将实验数据转化为有意义的结论。本部分涵盖了序列比对（BLAST）、系统发育树构建、基因表达数据（RNA-seq, microarray）的初步处理与可视化（如热图、火山图），以及对基因组/蛋白质结构数据库的有效检索和利用。 总结与展望 《分子生物学技术与应用（原书第X版）》力求平衡理论的深度与实验的可操作性。全书结构严谨，图表清晰，旨在帮助读者不仅掌握“如何做”，更能理解“为什么这样做”。本书是构建和深化分子生物学实验技能的坚实桥梁。

评分☆☆☆☆☆

这本书真是太令人惊叹了！我一直想在分子生物学领域深入研究，而这本《分子克隆实验指南》简直就像是为我量身定做的。收到这套书的时候，就被它厚重的分量和精美的装帧所吸引，打开后更是爱不释手。每一页都充满了翔实的知识和细致的步骤，从最基础的细胞培养到复杂的基因编辑，几乎涵盖了分子克隆的方方面面。我尤其喜欢它那些清晰的图示和表格，它们把抽象的概念变得直观易懂，大大降低了学习门槛。而且，这本书的语言风格非常严谨且富有条理，即使是初学者也能按照指导一步步进行实验，大大提高了实验的成功率。它不仅仅是一本教科书，更像是一位经验丰富的导师，随时随地解答我遇到的困惑。我迫不及待地想将书中的知识应用到我的研究中，相信它会成为我实验室不可或缺的宝藏。

评分☆☆☆☆☆

这套《分子克隆实验指南》简直是我的科研救星！作为一个刚刚步入分子生物学殿堂的学生，我常常被各种复杂的实验技术弄得焦头烂额。但是，当我翻开这套书后，我仿佛看到了希望的曙光。它的内容安排非常合理，从原理讲解到具体操作，循序渐进，丝毫不觉突兀。我特别欣赏它对于各种常用试剂和仪器的详细介绍，让我能够更清晰地了解实验所需的“硬件”和“软件”。书中还包含了大量经典的实验方案，并且在每个方案的开头都明确了其目的和应用领域，这对于我选择合适的实验思路非常有帮助。最让我印象深刻的是，书中很多地方都强调了实验过程中的注意事项和可能遇到的问题，并提供了相应的解决方案，这真的可以避免我走很多弯路。总而言之，这套书为我提供了坚实的基础和实用的指导，让我对未来的科研之路充满信心。

评分☆☆☆☆☆

不得不说，这本《分子克隆实验指南》的深度和广度都令人惊叹。它绝非一本简单的操作手册，而是对分子克隆这一复杂领域进行了系统而深入的剖析。我常常被书中那些对实验原理的细致解释所折服，作者们用通俗易懂的语言，将复杂的分子生物学机制阐释得淋漓尽致。此外，书中对于各种实验技术的优缺点、适用范围以及最新进展的探讨，也让我受益匪浅。它不仅仅教我“怎么做”，更让我理解“为什么这么做”，从而能够灵活地根据实际情况调整实验方案，进行创新性的研究。我甚至发现，书中对于实验设计的思路和数据分析的建议，都极具启发性。这套书的出现，无疑将分子克隆领域的研究推向了一个新的高度，也为我提供了广阔的视野和深入探索的动力。

评分☆☆☆☆☆

我一直认为，一本好的实验指南应该兼具理论深度和操作实用性，而这套《分子克隆实验指南》恰恰完美地做到了这一点。书中的内容非常翔实，几乎涵盖了我作为一名研究人员可能需要的所有分子克隆技术。我特别欣赏它在介绍每项技术时，都会详细阐述其背后的科学原理，以及各种方法的比较和选择依据，这让我能够真正理解每一步操作的意义。同时，书中提供的实验步骤清晰明了，并且配有大量的插图和表格，使得实验过程更加直观易懂。我曾经尝试过按照书中一个相对复杂的基因敲除实验方案进行操作，结果非常成功，这让我对本书的可靠性和实用性有了深刻的认识。它不仅是一本工具书，更是一本能帮助我提升实验技能和科研思维的宝典。

评分☆☆☆☆☆

收到这套《分子克隆实验指南》的时候，我最大的感受就是“内容爆炸”！它就像一个无尽的知识宝库，无论我翻到哪一页，都能找到我需要的信息。从基因的克隆、表达，到基因组的分析、修饰，这本书几乎涵盖了分子生物学研究的各个环节。我非常喜欢它在介绍每个实验技术时，都会给出详细的背景介绍、理论基础、仪器设备、试剂耗材以及完整的操作流程，并且会指出潜在的风险和注意事项。这对于我这样需要进行复杂实验的研究者来说，简直是太有用了！我经常会把书放在实验室里，随时查阅，它帮助我解决了许多在实验过程中遇到的难题。而且，书中还包含了很多前沿的研究方法和技术进展，让我能够及时了解该领域的最新动态，这对于保持科研的竞争力至关重要。

评分☆☆☆☆☆

不错，内容丰富，可以信赖的工具书

评分☆☆☆☆☆

经典书籍，当工具书使用的。经典书籍，当工具书使用的。经典书籍，当工具书使用的。

评分☆☆☆☆☆

经典的工具书，终于有中文版了

评分☆☆☆☆☆

好！！！收到后特别惊喜！！

评分☆☆☆☆☆

书不错，写的挺好，值得购买

评分☆☆☆☆☆

书的包装袋子有破损，，，，，而且书脊处有磨损，

评分☆☆☆☆☆

东西很不错，非常喜欢，下次还会再购买的啦，谢谢哦，呵呵。

评分☆☆☆☆☆

很好

评分☆☆☆☆☆

从读书开始就一直在用这套书，不错