內容簡介
《實用細胞培養技術(第2版)》共分三篇13章。第一篇有3章,分彆講述細胞培養的基本條件、基本技術和相關的研究方法;第二篇有4章,分彆講述動物細胞、人細胞、乾細胞和腫瘤細胞的培養方法;第三篇是應用篇,共6章,分別講述瞭細胞培養技術在病毒學、免疫學、腫瘤學、藥理學、乾細胞、毒理學等方麵的應用。《實用細胞培養技術(第2版)》始終保持實用性、可操作性和先進性的優點,其特點為:①所述培養技術是作者多年來的經驗總結,技術成熟,方法可靠,可重復性好;②《實用細胞培養技術(第2版)》較詳盡地介紹瞭各種細胞的製備與培養,可滿足基礎研究及臨床應用的需求;③培養方法與實驗設計密切配閤,與臨床應用相適應,能解決診斷、預防和治療上的各種實際問題;④實驗方法先進,反映瞭研究與應用的新進展等。《實用細胞培養技術(第2版)》既是學習細胞培養技術的理論教材,又是一本實驗技術手冊。是從事細胞學、病毒學、免疫學、藥理學、毒理學、遺傳學、臨床醫學等工作的人員,以及從事組織和細胞工程技術研究、生産和管理人員的重要工具書。既可作為醫學和生物技術等專業本科生和研究生的教材,又可作為從事生物學、生物材料學及臨床醫學科研人員的參考書。
內頁插圖
目錄
緒論
第一篇 細胞培養的基礎
第一章 細胞培養的基本條件
第一節 細胞培養實驗室的建立
第二節 細胞培養用液
第二章 細胞培養的基本技術
第一節 無菌技術
第二節 標本材料的選擇和處理
第三節 細胞培養類型及培養技術
第四節 細胞形態學檢查法
第五節 細胞培養汙染的檢測、排除
第六節 細胞的凍存、復蘇與運輸
第三章 培養細胞研究及檢測技術
第一節 細胞周期分析方法
第二節 細胞同步化方法
第三節 細胞融閤
第四節 細胞剋隆技術
第五節 培養細胞的轉化
第六節 細胞凋亡
第七節 培養細胞基因導人技術
第八節 細胞酶活性測定
第九節 流式細胞分選術
第二篇 細胞培養技術
第四章 動物細胞培養
第一節 雉科動物細胞培養
第二節 鼠科動物細胞培養
第三節 兔科動物細胞培養
第四節 犬科與豬科動物細胞培養
第五章 人細胞培養
第一節 人胚細胞的製備與培養
第二節 人內皮細胞的製備與培養
第三節 人結締組織細胞培養
第四節 人骨細胞培養
第五節 人肌細胞的培養
第六節 人肺泡細胞培養
第七節 人乳腺上皮細胞培養
第八節 人胰島細胞的製備與鑒定
第九節 人甲狀腺細胞的製備與應用
第十節 入神經元的培養
第六章 乾細胞的培養
第一節 飼養層細胞與條件培養基的製備
第二節 乾細胞的建係
第三節 胚胎乾細胞的培養
第四節 人皮膚乾細胞的培養
第五節 大鼠心肌乾細胞的培養
第六節 人造血乾細胞的分離與培養
第七節 人骨髓間充質乾細胞的培養與誘導分化
第八節 大鼠神經乾細胞的培養
第九節 胰島乾細胞的培養
第十節 誘導性多潛能乾細胞
第七章 腫瘤細胞培養
第一節 腫瘤細胞的取材及培養
第二節 培養腫瘤細胞的生物學鑒定
第三節 影響腫瘤細胞生長實驗
第四節 常見腫瘤的原代細胞培養
第五節 常用腫瘤細胞株的培養
第三篇 細胞培養技術的應用
第八章 細胞培養在病毒學研究中的應用
第一節 增殖和分離鑒定病毒
第二節 病毒性感染的血清學診斷
第三節 體外抗病毒藥效試驗
……
附錄一 實驗室常用的細胞係(株)
附錄二 常用人工閤成細胞培養基
附錄三 細胞培養及相關試驗常用緩衝液
附錄四 等密度沉降分離時某些哺乳動物細胞在Percoll中的漂浮密度
中英文對照索引
精彩書摘
2.內髒和實體瘤的取材 人和動物體內各髒器及其體內所發生的腫瘤是較常用的培養材料。內髒除消化道外基本是無菌的,但有些實體瘤的核心部位有壞死並嚮外破潰,有可能被細菌感染。在內髒和實體瘤取材時,一定要明確和熟悉自己所需組織類型和部位,要仔細剪除不需要的部位,如血管、淋巴、神經和組織間的結締組織;在取腫瘤組織時,要盡可能在腫瘤細胞分布較多的部位,避開壞死液化部位。
(1)人體內髒和實體瘤的取材一般是依賴外科手術時完成的。動物取材時要選用胚胎或成體小動物,選用適當的處死動物的方法(如引頸法、窒息法或麻醉法)。將剛處死的小動物整個浸入盛有0.3%苯紮溴銨或75%乙醇的燒杯中5分鍾,注意時間不能太長以免消毒液從口和其他孔徑進入體內,影響組織活力。不能用浸泡消毒法的較大動物,也可在較大範圍的區域剃毛,然後用75%乙醇局部消毒。
(2)動物消毒後的操作最好在超淨颱內進行。將動物用消毒過的大頭針固定在無菌的蠟質闆或小木闆上,用眼科剪和止血鉗剪開皮膚,解剖胸腔或腹腔,按部位剪下所需要的髒器或腫瘤組織。取材中要按解剖層次更換剪刀,絕不能用一把剪刀從皮膚剪到所需髒器。
(3)取好的組織要放置在另一個無菌的平皿內,倒入少許無血清培養液或Hanks液,接下去進行原代培養的操作。
3.體液中懸浮細胞的取材 體液(body fluid)包括血液、腦脊髓液、骨髓、精液、胸腔積液、腹水、羊水、陰道分泌液等。血液中的淋巴細胞和粒細胞是常用的培養材料,多用於淋巴細胞免疫功能的研究和應用,以及血細胞染色體的分析等。
(1)血液取材一般多采用靜脈取血,采血時要嚴格無菌。為防止凝血常用肝素抗凝劑,用量以産生抗凝效果的最小量為宜,用量過大會導緻溶血。肝素的常用濃度為20U/ml,抽血前針管內要用濃度較高的肝素(500U/ml)濕潤。
(2)其他體液(如腦脊髓液、骨髓、胸腔積液、腹水、羊水等)的取材,一般使用長號碼的無菌注射器直接插人相應部位的體腔內抽取,取齣後立即注入無菌離心管內,采用離心法分離。一般用500-1000r/min的低轉速離心,離心後最好立即培養。血液和其他體液懸浮細胞不宜低溫保存。
……
前言/序言
好的,這裏為您提供一份關於 《分子生物學原理與技術》(假設的書名,旨在避開您提供的具體書名,並提供一份詳細、專業的圖書簡介)的詳細介紹。 --- 《分子生物學原理與技術》(第X版)圖書簡介 一本全麵深入、緊扣前沿的分子生物學經典教材 在理解生命活動的復雜機製、探索疾病的根本原因以及開發創新生物技術和藥物的過程中,分子生物學扮演著核心角色。《分子生物學原理與技術》旨在為生命科學領域的學生、研究人員及從業者提供一個全麵、係統且與時俱進的學習資源。本版教材不僅夯實瞭分子生物學的核心理論基礎,更將最新的研究進展、關鍵的技術突破與實際應用緊密結閤,確保讀者能夠掌握當前分子生物學領域最前沿的知識體係。 本書的定位與特點: 本書並非僅僅是知識的堆砌,而是一本將理論深度與實踐廣度完美融閤的工具書。我們緻力於構建一個清晰的知識框架,引導讀者從基因組、轉錄組、蛋白質組乃至細胞器間的相互作用層麵,係統性地理解生命信息如何在分子水平上傳遞、調控和錶達。 I. 理論深度:從結構到功能,構建堅實基礎 本書首先聚焦於分子生物學的基石概念。在第一部分“分子基礎”中,我們詳細闡述瞭核酸(DNA和RNA)的化學結構、高級結構(如染色質結構)及其在細胞核內的組織方式。對遺傳物質的深入理解是掌握後續所有技術的前提。 基因組學基礎: 詳盡討論瞭原核與真核生物基因組的組織差異,重點解析瞭基因結構、調控元件(啓動子、增強子等)的識彆與功能。對於真核生物特有的基因錶達調控機製,如錶觀遺傳學修飾(DNA甲基化、組蛋白修飾)在基因沉默與激活中的作用,進行瞭細緻的圖文解析。 中心法則的拓展: 不僅涵蓋瞭經典的DNA復製、轉錄和翻譯過程,還重點介紹瞭逆轉錄、RNA剪接、RNA編輯等非標準過程,並結閤最新的非編碼RNA(ncRNA,如miRNA, lncRNA)在基因調控網絡中的樞紐地位。 蛋白質的生物閤成與摺疊: 深入解析瞭核糖體的工作機製、翻譯後修飾(PTM)的多樣性及其對蛋白質功能的影響。特彆關注瞭伴侶蛋白在正確蛋白質摺疊和質量控製中的關鍵作用。 II. 技術前沿:原理驅動,操作精細 本書的另一大亮點在於其對分子生物學核心技術的係統梳理與講解。技術部分被設計成模塊化的結構,既能滿足初學者建立清晰技術流程圖的需求,也能為資深研究者提供關鍵優化參數的參考。 核酸分離與純化技術: 涵蓋瞭從細胞裂解、去除雜蛋白到高效分離特定分子(質粒DNA、總RNA、基因組DNA)的全流程。詳細對比瞭基於沉澱、離子交換層析和親和層析等不同原理的純化策略。 分子剋隆與重組技術: 這是現代生物技術的核心。本書詳細講解瞭限製性內切酶、連接酶的使用規範,核酸體外閤成(PCR/qPCR)的反應優化,以及各種載體係統(如酵母錶達載體、腺病毒載體)的選擇和應用。重點剖析瞭高保真PCR技術及其在序列分析中的應用。 基因編輯革命: 專門開闢章節深入探討瞭CRISPR/Cas9係統的作用機理、靶嚮設計原則,以及其在基因敲除、敲入和堿基編輯中的應用優勢與脫靶風險的規避。同時,也簡要介紹瞭TALENs和ZFNs等早期技術作為對比。 高通量測序技術(NGS): 詳盡介紹瞭二代測序(Illumina平颱為主)的文庫構建、測序原理和數據分析流程。針對全基因組測序(WGS)、外顯子組測序(WES)和RNA測序(RNA-Seq)的具體應用場景和數據解讀策略進行瞭專題講解。 蛋白質組學基礎技術: 包括蛋白質的免疫沉澱(IP)、共免疫沉澱(Co-IP)用於研究蛋白質互作;二維電泳(2D-PAGE)和質譜(MS)技術在蛋白質鑒定和定量中的應用。 III. 應用導嚮:連接基礎研究與實際轉化 本書不僅關注“如何做”,更強調“為什麼做”以及“做瞭能解決什麼問題”。 疾病分子機製: 結閤癌癥、神經退行性疾病等實例,闡述分子生物學原理如何揭示病理過程,例如腫瘤抑製基因的失活、信號轉導通路的異常激活等。 生物製藥與基因治療: 探討瞭利用分子技術構建重組蛋白藥物、開發病毒載體用於基因替代治療或免疫調節的前景與挑戰。 生物信息學接口: 強調瞭數據處理的重要性,對常用數據庫的檢索(如NCBI, PDB)、序列比對(BLAST)和基因錶達譜分析的入門級操作進行瞭介紹,以幫助讀者有效處理實驗産生的大數據。 讀者對象: 本書適用於高等院校生命科學、生物技術、醫學、藥學等相關專業本科生、研究生及博士後研究人員。同時,對於在生物技術公司、製藥企業從事研發和質量控製工作的專業人士,本書也是一本極為實用的參考手冊。 總結: 《分子生物學原理與技術》以其嚴謹的科學態度、清晰的邏輯結構和對技術細節的精準把握,力求成為讀者在分子生物學領域探索未知、解決實際問題的可靠夥伴。通過係統學習,讀者將能夠自信地設計實驗方案、準確解讀復雜數據,並為未來的生物科學研究打下堅實的基礎。