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内容简介

　　《现代分子生物学模块实验指南（第2版）》由10个模块组成，内容包括目的基因的克隆及分析，核酸分子杂交，大规模基因表达差异分析，单核苷酸多态性的检测，目的基因的遗传转化，蛋白质样品的制备、分离与鉴定，目的蛋白质表达、纯化与检测，蛋白质相互作用的研究，激光扫描共聚焦显微镜的应用，生物信息学软件与数据库应用，共52个实验。为了模块的完整性及对模块研究内容的全面理解，模块内除了编入适合本科教学的实验内容之外，还编入了扩展性的实验内容，可为本科生创新实验及本科生毕业论文提供参考。
　　《现代分子生物学模块实验指南（第2版）》可作为综合性大学和师范、医学、药学、农林等院校生物类专业本科生和研究生的分子生物学实验教学用书，也可作为生物学相关领域研究人员的参考书。

内页插图

目录

模块一 目的基因的克隆及序列分析
1-1 RNA的提取及检测
1-2 RT-PCR方法扩增目的基因
1-3 cDNA末端快速扩增法（RACE）合成目的基因
1-4 目的基因的克隆
1-5 目的基因的序列测定及初步分析
1-6 cDNA文库的构建及目的基因的筛选
1-7 mRNA差别显示克隆差异表达基因
1-8 电子克隆法获得目的基因
1-9 化学合成法获得目的基因

模块二 核酸分子杂交
2-1 Southern杂交
2-2 Northern杂交
2-3 原位杂交
2-4 原位RT-PCR

模块三 大规模基因差异表达分析
3-1 基因芯片分析
3-2 基于第二代高通量测序技术的转录组测序分析
3-3 差异表达基因功能富集分析
3-4 实时荧光定量PCR检测基因表达

模块四 单核苷酸多态性的检测
4-1 衍生酶切扩增多态性序列法
4-2 Taqman荧光探针法
4-3 高分辨率熔解曲线法
4-4 定向诱导基因组局部突变技术

模块五 目的基因的遗传转化
5-1 PCR法克隆目的基因全长
5-2 Gateway技术构建表达栽体
5-3 农杆菌真空渗入法遗传转化
5-4 水稻愈伤组织的遗传转化
5-5 RNAi发夹式载体构建及转化
5-6 CRISPR／Cas9技术构建表达载体
5-7 大规模突变体库的构建

模块六 蛋白质样品的制备、分离与鉴定
6-1 蛋白质样品的制备
6-2 蛋白质的定量
6-3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质
6-4 双向电泳分离蛋白质
6-5 荧光标记差异分析凝胶电泳法分析差异表达蛋白质
6-6 蛋白质样品的质谱鉴定

模块七 目的蛋白质表达、纯化与检测
7-1 目的基因原核表达质粒的构建
7-2 谷胱甘肽S-转移酶（GST）融合蛋白的表达与纯化
7-3 组氨酸标签融合蛋白的表达与纯化
7-4 麦芽糖结合蛋白（MBP）融合蛋白的表达与纯化
7-5 免疫印迹检测目的蛋白质的表达

模块八 蛋白质相互作用的研究
8-1 经典酵母双杂交
8-2 Pul1-down分析蛋白质相互作用
8-3 蛋白质亚细胞共定位
8-4 免疫共沉淀
*8-5 T7噬菌体展示筛选技术
*8-6 细胞质酵母双杂交系统

模块九 激光扫描共聚焦显微镜的应用
9-1 激光扫描共聚焦显微镜的基本使用
9-2 花粉管內钙离子梯度分布的观察
9-3 动物细胞微丝微管细胞核共定位观察
9-4 激光扫描共聚焦显微镜检测荧光蛋白

模块十 生物信息学软件与数据库应用
10-1 常用分子生物学数据库检索
10-2 常用分子生物学软件使用
10-3 蛋白质结构及其相互作用预测

附录

前言/序言

　　21世纪是生命科学的世纪，各种组学研究使得生命科学由描述性的定性科学走向精确定量的科学，对生命现象的认识从还原论到整体论，以分子生物学为先导的生命科学的发展正面临一个新的高峰。分子生物学是从分子水平上研究生命本质的一门新兴边缘学科，以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象，是当前生命科学中发展最快并正在与其他学科广泛交叉与渗透的前沿研究领域。分子生物学基本理论的建立与发展都是以实验为基础的，只有通过实验室的实际操作训练，才能进一步理解实验背后的科学理论，达到掌握实验基本技能、培养理论与实践相结合能力、提高科学思维能力和创新能力的目的。
　　为加强分子生物学实验内容的完整性、先进性，我们结合自己的科研实践，编写了《现代分子生物学模块实验指南》，自2007年由高等教育出版社出版发行以来，被部分高校选用作为生命科学类本科及研究生教材或参考图书，同时也受到相关科研人员的欢迎。近十年来分子生物学技术日新月异，许多新的技术得到了广泛应用。应读者的要求，我们在第1版的基础上进行了增删与修改，予以再版。
　　为反映现代分子生物学实验技术最新的研究进展与发展趋势，本书第2版立足于基础分子生物学实验的同时增加了实时荧光定量PCR、第二代高通量测序、双分子荧光互补、单核苷酸多态性检测、CRISPR/Cas9等技术的详细操作流程。
　　我们对全书进行了认真修订，具体分工如下：第一模块目的基因的克隆及序列分析（许志茹），第二模块核酸分子杂交（徐启江），第三模块大规模基因差异表达分析（王宇），第四模块单核苷酸多态性的检测（王宇），第五模块目的基因的遗传转化（张旸），第六模块蛋白质样品的制备、分离与鉴定（解莉楠），第七模块目的蛋白质表达、纯化与检测（蓝兴国），第八模块蛋白质相互作用的研究（蓝兴国），第九模块激光扫描共聚焦显微镜的应用（张旸），第十模块生物信息学软件与数据库应用（王宇）。修订过程中还得到了杨洪一、赵翊丞两位老师的大力支持，同时感谢高等教育出版社生命科学分社的同志们对本书出版的大力协助与支持。
　　本书受到国家自然科学基金委员会“基础科学人才培养基金科研训练及科研能力提高项目…‘中央高校基本科研业务费专项资金项目（2572014EA03）”资助。
　　本书的编写人员虽然在相关研究领域具有自己的学术专长，并且都是处于教学科研第一线的教师、博士研究生，但限于学术水平和编写经验的不足，难免存在疏漏和差错，恳请各位读者给予批评指正，以便进一步修改完善。
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