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内容简介

　　

　　《诊断微生物学新技术》由两个重要部分组成：（1）技术篇；（2）应用篇。第一部分：系统、详细地介绍目前用于临床微生物学检测的各种新技术，包括自动化血培养、快速抗原试验、抗体检测、基于流式细胞仪的抗生素耐药检测技术、实时细胞分析技术、基于脂肪酸的微生物鉴定和药敏试验、基于MALDI-TOF质谱技术的微生物鉴定、各种分子诊断技术如体外核酸扩增技术、PCR及其衍生技术、非PCR靶扩增技术、探针扩增技术、信号扩增技术、实时核酸定量技术、扩增产物检测技术、直接核酸测序技术、芯片技术、基于非放大探针的微生物检测和鉴定、分子分型技术、PCR/电喷雾电离质谱等先进技术的原理、方法和特点，为这些新技术在临床微生物学中的应用提供坚实的技术基础。第二部分：重点介绍上述新技术在临床微生物检验中的应用，包括细菌快速鉴定和药敏试验等。

目录

原著作者寄语
序言一
序言二
序言三
译者的话

第一篇 技术篇
第一章 自动化血培养
第二章 呼气试验检测幽门螺旋杆菌和曲霉菌
第三章 快速抗原检测
第四章 抗体检测的原理及应用
第五章 流式细胞技术在抗生素耐药检测的应用
第六章 以生化反应为基础的微生物鉴定系统
第七章 感染性疾病生物标志物：非抗体依赖性宿主应答
第八章 采用实时细胞功能分析系统进行微生物和病毒感染的功能检测
第九章 基于细胞脂肪酸的微生物鉴定和药敏试验
第十章 MALDI—TOF质谱技术在微生物鉴定中的应用
第十一章 核酸提取技术
第十二章 非扩增核酸探针技术在微生物检测和鉴定中的应用
第十三章 最先进的分子分型技术
第十四章 体外核酸扩增技术
第十五章 PCR及其衍生技术
第十六章 非PCR靶核酸扩增技术
第十七章 探针扩增技术
第十八章 信号扩增技术
第十九章 实时定量核酸分析
第二十章 扩增产物检测技术
第二十一章 凝胶电泳、DNA印迹和微孔板比色系统
第二十二章 直接核苷酸测序鉴定扩增产物
第二十三章 微阵列扩增产物的检测与鉴定
第二十四章 利用荧光淬灭或能量转移机制实时检测扩增产物
第二十五章 电离质谱技术鉴定微生物核酸扩增产物
第二十六章 PCR扩增产物灭活

第二篇 应用篇
第二十七章 通用基因扩增和测序技术在细菌鉴定中的应用
第二十八章 血液和血液制品的分子筛查技术
第二十九章 性传播疾病的分子诊断
第三十章 结核分枝杆菌诊断和耐药性检测新进展
第三十一章 快速筛查和鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌
第三十二章 食源性病原体的最新检测方法
第三十三章 床旁即时分子诊断的技术与应用
第三十四章 微生物感染的分子鉴别诊断：多重PCR的方法，应用和技术平台
第三十五章 微生物诊断技术在兽医学领域的进展
第三十六章 兽医诊断病毒学最新进展：来自世界动物卫生组织合作中心的报告
第三十七章 深度测序：技术进展与临床微生物学应用
第三十八章 诊断病毒学中病毒RNA剪接的测定
第三十九章 应用基因芯片检测和鉴定临床重要真菌
第四十章 艰难梭菌的实验室检测技术进展
第四十一章 HIV感染的分子诊断：当前发展状况
第四十二章 微球悬浮阵列法检测和鉴定呼吸道病毒
第四十三章 人乳头状瘤病毒感染的分子诊断与监测
第四十四章 分子检测在脓毒症实验室诊断中的作用
第四十五章 检测新发感染病原体的先进病理学技术
第四十六章 利用宿主和微生物microRNA谱诊断及评价微生物感染
第四十七章 先进技术检测结果的解读和临床相关性

精彩书摘

　　《诊断微生物学新技术》：
　　二、DNA印迹技术的原理
　　DNA印迹技术是用于检测样品中特定DNA序列的分子生物学方法。DNA印迹技术结合了凝胶电泳和探针杂交的方法。片段大小和探针序列被用于决定结果的特异性。根据分子大小在琼脂糖凝胶电泳上分离待测DNA。然后，凝胶上带负电荷的DNA条带被转移到带正电荷的膜上。转移前，有时需要用酸处理DNA凝胶，使大于15 kb的DNA被打断为小片段，使得DNA从凝胶向膜的转印更有效。一些研究也用碱性溶液处理DNA凝胶，碱性环境可以提高带负电荷的DNA结合到带正电荷的膜的效率，同时使DNA变性成单链用于后续的杂交。转印过程是将凝胶放置在缓冲液饱和的滤纸上方，然后将硝酸纤维素膜或尼龙膜放置在凝胶上方（或若用电转移，朝向带正电的方向），最后在膜的上方放一些干滤纸。
　　压力需均匀地施加在凝胶上，以确保凝胶和膜之间良好和充分的接触。由于毛细管的虹吸作用，缓冲液通过底部滤纸将凝胶中的变性DNA移动至硝酸纤维素膜或尼龙膜上。这个过程需要几个小时才能完成。DNA条带在膜上的相对位置与凝胶上一致，在分辨率上有最小的损失。之后，将膜放置在真空或普通烤箱中80℃烘烤2h（标准条件，硝酸纤维素膜或尼龙膜）或用紫外线照射（尼龙膜），使转移的DNA永久性地固定在膜上。单链DNA对于硝酸纤维素膜有较强的亲和力，因此放射性或染料标记的探针能够结合到膜上的结合位点。为了防止非特异性结合，用含鲑鱼或鲱鱼精子DNA、浓度各为0.2%的聚蔗糖（蔗糖的人造聚合物，Ficoll）、聚乙烯吡咯烷酮和牛血清白蛋白的溶液处理膜。这种预杂交液也常常用于杂交反应。DNA探针标记一段特定的与待测DNA片段互补的单链DNA片段以检测待测DNA是否存在。将膜与杂交探针一起孵育，探针与互补DNA序列结合，标记的探针显示出特定DNA片段的存在和位置。为了确保探针与样本DNA结合的特异性，最常用的杂交方法采用去离子甲酰胺和去垢剂如SDS来减少探针的非特异性结合。杂交后，用SSC缓冲液洗去膜上的未结合探针，如果采用的是放射性探针或荧光探针，则通过放射自显影的方法在X胶片上显示杂交的情况，如果采用显色的方法，则通过在膜上显色来读取结果。传统的DNA印迹是一个复杂的过程，并不适合快速分子诊断的需要和发展趋势，也没有被用于诊断。但是DNA杂交的技术和原理被用来发展很多现代的技术，如本章后面要介绍的微孔板法和另一章要介绍的基因芯片技术。
　　尽管我们这里讨论的凝胶电泳和DNA印迹技术并不是常用的分子诊断技术，但这两个技术被用于发展很多现代分子诊断方法。对临床医生和感染病性疾病专家而言，了解这两项技术的基本原理、操作过程和局限性有助于他们更好地解释检测结果。
　　……

前言/序言

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