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基本信息

作者：朱玉贤

出版社：高等教育出版社

出版日期：2013-01-01

ISBN：9787040351583

字数：

页码：492

版次：4

装帧：平装

开本：16

商品重量：1.1kg

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目录

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作者介绍

文摘

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版权页：



插图：



5.5.2荧光差异显示双向电泳技术
早期的蛋白质组学研究内容主要是蛋白质组的表达模式，即利用常规2—DE技术鉴定并建立某一生物体在特定时期的全部蛋白表达谱。然而蛋白质组在各个生命进程中是动态变化的，不同生物的个体、组织或细胞在不同发育时期、分化阶段以及不同的生理、病理条件下基因表达是不一致的，所对应的蛋白质组也具有特异性。于是，比较蛋白质组学（parative proteomics）应运而生，并逐渐成为后基因组学时代重要学科。
近年来，一种在传统2—DE技术上结合了多重荧光分析技术的新方法——荧光差异显示双向电泳技术（2—D fluorescence difference gel electrophoresis，2D—DIGE）的发明基本解决了传统2—DE难以克服的系统误差白质浓度变化给出线性反应，而常规银染法只能检测低至1～60 ng的蛋白质，仅有约2个数量级的线性动态范围。
在DIGE技术中，内标（internal standard，IS）是所有实验样本的混合物，凝胶中的每个蛋白点都有自己的内标，不同样本间蛋白质的比较是基于每个蛋白点相对于凝胶内内标的相对变化，分析软件根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校正，保证检测到真实的蛋白质丰度变化。由于同一实验中所有凝胶都使用同一内标，每种蛋白质都可以通过内标与其他任何凝胶上的同种蛋白质进行有效的比较。内标的引入，增加了凝胶间匹配的可信度，有效地鉴别系统误差或者样品中的生物学变化，并进行准确的定量分析。
虽然2D—DIGE技术本身的优势大大降低了实验中出现的系统误差，但是由于所用荧光染料在不同波长激发光下表现出不同的荧光特性，低丰度蛋白质定量时较易出现偏差。

序言

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